JD-ZWSJ非洲豬瘟快速診斷試劑盒非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒???? ?? ??? ???? ?? PCR ?? ?? ??JD-ZWSJ非洲豬瘟快速診斷試劑盒非洲豬瘟病毒熒光PCR檢測試劑盒：

【獸藥名稱】

　　通用名稱：非洲豬瘟病毒熒光PCR快速檢測試劑盒

　　商品名稱：無

　　漢語拼音：Feizhouzhuwenbingdu Yingguang PCR Kuaisu Jiance Shijihe

　　英文名稱：Real-time PCR for Rapid Detection of African Swine Fever Virus

　　【主要成分與含量】

　　【作用與用途】本試劑盒適用于豬血液、豬肉組織、淋巴結(jié)樣本中非洲豬瘟病毒核酸的檢測。

　　【用法與判定】

　　1 用法

　　1.1 樣品處理及模板準(zhǔn)備

　　1.1.1 樣品處理

　　·組織樣品處理：分別從豬肉組織、淋巴結(jié)不同位置取樣，用手術(shù)剪剪碎混勻后取0.1g于研磨器中研磨，加入1.5ml生理鹽水繼續(xù)研磨，待勻漿后轉(zhuǎn)至1.5ml無菌離心管，12000 r/min離心2分鐘，取上清200μl備用。

　　·血液樣品無需處理，取200μl備用。

　　1.1.2 模板準(zhǔn)備

　　·根據(jù)不同的樣本類型，按照下表準(zhǔn)備相應(yīng)的樣本用量。

　　·將樣本加入到1.5 ml離心管中，加入下表推薦體積的Solution A，渦旋震蕩20 s，并按照下表推薦的處理方法，室溫靜置3-5 min，或95℃金屬浴振蕩孵育3-5 min。

　　·樣本充分裂解后（95℃金屬浴振蕩孵育的樣本需恢復(fù)室溫），加入下表推薦體積的Solution B，并渦旋震蕩30 s，12000rpm離心2min，上清即為模板DNA。

　　·處理后的樣本如在2小時內(nèi)進行下一步試驗，請于4℃保存，如不能立即進行下一步試驗，請于-20℃保存。

　　備注：組織樣本加入10倍體積的生理鹽水制成組織勻漿液后，可按照血液樣本的處理方法進行處理。

　　1.1.3可利用商品化試劑盒提取核酸進行反應(yīng)，效果更佳

　　1.2 熒光PCR擴增

　　1.2.1 試劑準(zhǔn)備

　　實驗前20分鐘將試劑從冰箱取出并恢復(fù)至室溫，使其*融化，充分混勻后瞬時離心去除管壁吸附液體。

　　1.2.2 配制反應(yīng)體系

　　按下表1體系，在配套PCR管中配制反應(yīng)體系，蓋緊管蓋后瞬時離心10秒，轉(zhuǎn)移至擴增區(qū)。

　　表1  PCR反應(yīng)體系

　　1.2.3 PCR擴增

　　快速模式

　　表2 儀器PCR擴增參數(shù)

2 判定

　　2.1 合理調(diào)整閾值線，不同儀器可根據(jù)儀器噪音情況進行調(diào)整。

　　2.2 試劑盒有效性判定

　　·陰性對照：無Ct值，線形為直線或微斜，無明顯指數(shù)增長。

　　·陽性對照：Ct值≤30，有明顯指數(shù)增長，呈典型的S型曲線。

　　2.3 樣本結(jié)果判定

　　·樣本檢測結(jié)果Ct值≤38，有明顯指數(shù)增長，判定為陽性，表明樣本中檢測出非洲豬瘟病毒。

　　·樣本檢測結(jié)果38＜Ct≤40，判定為可疑。應(yīng)對樣本進行復(fù)測，若復(fù)測結(jié)果Ct值仍在38~40之間，有明顯指數(shù)增長，則判定為陽性，否則為陰性。

　　·樣本檢測結(jié)果無Ct值，判定為陰性，表明樣本中未檢測出非洲豬瘟病毒。

　　【注意事項】

　?。?）實驗前請仔細(xì)閱讀本試劑盒說明書，嚴(yán)格按步驟執(zhí)行，不使用本試劑盒提供的組份或不按照說明書進行實驗可能導(dǎo)致錯誤結(jié)果。

　?。?）所有試劑應(yīng)在規(guī)定溫度儲存。-20℃保存的試劑在使用前應(yīng)充分混勻。試劑盒反復(fù)凍融次數(shù)不宜超過5次。

　?。?）實驗操作應(yīng)按照國家有關(guān)臨床基因擴增實驗室管理規(guī)范執(zhí)行，實驗過程應(yīng)分區(qū)（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、核酸擴增區(qū)），各區(qū)物品為，不得交叉使用，避免污染。

　?。?）操作臺、移液器、離心機等儀器用品應(yīng)經(jīng)常用1%次氯酸鈉、75%乙醇或紫外燈進行消毒。耗材應(yīng)進行無酶處理。

　?。?）待檢樣本、試劑盒組份及實驗中的廢棄物需按照具有潛在傳染性物質(zhì)處理方法進行處理。

　?。?）為防止熒光干擾，應(yīng)避免使用含熒光物質(zhì)的手套，避免用手直接接觸，預(yù)防交叉污染。

　　（7）檢測結(jié)果為陰性，并不*代表為非感染狀態(tài)，具體診斷需結(jié)合獸醫(yī)臨床。

　?。?）產(chǎn)生假陰性的可能原因為：待檢樣本在采集、運輸、保存及核酸提取過程中操作不當(dāng)造成DNA降解；樣本中核酸濃度低于z低檢測限；病毒待測靶基因出現(xiàn)變異；未經(jīng)驗證的其他干擾因素。

　?。?）產(chǎn)生假陽性的可能原因為：待檢樣本采集、運輸及核酸提取過程中發(fā)生交叉污染。

　　【規(guī)格】 50反應(yīng)/盒

　　【貯藏及有效期】 試劑盒-20℃以下冷凍避光保存，有效期為12個月。